Kiromatogirafi olomi jẹ ọna akọkọ fun idanwo akoonu ti paati kọọkan ati awọn aimọ ni awọn ohun elo aise, awọn agbedemeji, awọn igbaradi ati awọn ohun elo apoti, ṣugbọn ọpọlọpọ awọn oludoti ko ni awọn ọna boṣewa lati gbarale, nitorinaa o jẹ eyiti ko le ṣe idagbasoke awọn ọna tuntun. Ninu idagbasoke ti awọn ọna ipele omi, ọwọn kiromatografi jẹ ipilẹ ti kiromatografi omi, nitorinaa bii o ṣe le yan iwe chromatographic ti o yẹ jẹ pataki. Ninu nkan yii, onkọwe yoo ṣe alaye bi o ṣe le yan iwe kiromatogiramu omi lati awọn aaye mẹta: awọn imọran gbogbogbo, awọn ero ati ipari ohun elo.
A.Awọn imọran gbogbogbo fun yiyan awọn ọwọn chromatography olomi
1. Ṣe ayẹwo awọn ohun-ini ti ara ati kemikali ti itupalẹ: gẹgẹbi ilana kemikali, solubility, iduroṣinṣin (gẹgẹbi boya o rọrun lati wa ni oxidized / dinku / hydrolyzed), acidity ati alkalinity, bbl, paapaa ilana kemikali jẹ bọtini. ifosiwewe ni ti npinnu awọn ohun-ini, gẹgẹbi ẹgbẹ ti o ni idapọpọ ni ifasilẹ ultraviolet ti o lagbara ati fluorescence ti o lagbara;
2. Ṣe ipinnu idi ti itupalẹ: boya iyapa giga, ṣiṣe ti ọwọn giga, akoko itupalẹ kukuru, ifamọ giga, resistance titẹ giga, igbesi aye ọwọn gigun, iye owo kekere, bbl nilo;
- Yan iwe chromatographic ti o yẹ: loye akopọ, ti ara ati awọn ohun-ini kemikali ti kikun chromatographic, gẹgẹbi iwọn patiku, iwọn pore, ifarada otutu, ifarada pH, adsorption ti analyte, bbl
- Awọn ero fun yiyan awọn ọwọn chromatography omi
Abala yii yoo jiroro lori awọn nkan ti o yẹ ki o gbero nigbati o ba yan iwe kiromatogiramu kan lati iwoye ti awọn ohun-ini ti ara ati kemikali ti ọwọn kiromatofi funrararẹ. 2.1 Filler matrix
2.1.1 Silica gel matrix Matrix kikun ti ọpọlọpọ awọn ọwọn chromatography olomi jẹ gel silica. Iru kikun yii ni mimọ giga, idiyele kekere, agbara ẹrọ giga, ati pe o rọrun lati yipada awọn ẹgbẹ (bii phenyl bonding, amino bonding, cyano bonding, bbl), ṣugbọn iye pH ati iwọn otutu ti o fi aaye gba ni opin: awọn Iwọn pH ti ọpọlọpọ awọn ohun elo matrix gel silica jẹ 2 si 8, ṣugbọn iwọn pH ti awọn ipele ifunmọ silica jeli ti a yipada ni pataki le jẹ jakejado bi 1.5 si 10, ati pe awọn ipele isunmọ silica jeli ti a yipada ni pataki tun wa ti o jẹ iduroṣinṣin ni pH kekere, bii Agilent ZORBAX RRHD stablebond-C18, eyiti o jẹ iduroṣinṣin ni pH 1 si 8; Iwọn otutu oke ti matrix gel silica jẹ igbagbogbo 60 ℃, ati diẹ ninu awọn ọwọn kiromatogirafi le farada iwọn otutu ti 40 ℃ ni pH giga.
2.1.2 Polymer matrix Polymer fillers jẹ okeene polystyrene-divinylbenzene tabi polymethacrylate. Awọn anfani wọn ni pe wọn le fi aaye gba iwọn pH ti o pọju - wọn le ṣee lo ni iwọn 1 si 14, ati pe wọn jẹ diẹ sii si awọn iwọn otutu giga (le de ọdọ 80 ° C). Ti a ṣe afiwe pẹlu awọn ohun elo C18 ti o da lori siliki, iru kikun yii ni hydrophobicity ti o lagbara sii, ati pe polymer macroporous jẹ doko gidi ni pipin awọn ayẹwo bi awọn ọlọjẹ. Awọn aila-nfani rẹ ni pe ṣiṣe ti ọwọn dinku ati pe agbara ẹrọ jẹ alailagbara ju ti awọn ohun elo ti o da lori silica. 2.2 patiku apẹrẹ
Pupọ julọ awọn ohun elo HPLC ode oni jẹ awọn patikulu iyipo, ṣugbọn nigbami wọn jẹ awọn patikulu alaibamu. Awọn patikulu iyipo le pese titẹ iwe kekere, ṣiṣe ti o ga julọ, iduroṣinṣin ati igbesi aye to gun; nigba lilo awọn ipele alagbeka giga-viscosity (gẹgẹbi phosphoric acid) tabi nigbati ojutu ayẹwo jẹ viscous, awọn patikulu alaibamu ni agbegbe agbegbe ti o tobi ju, eyiti o jẹ itara diẹ sii si iṣẹ kikun ti awọn ipele meji, ati pe idiyele jẹ iwọn kekere. 2.3 patiku iwọn
Ti o kere si iwọn patiku, ti o ga ni ṣiṣe ti ọwọn ati pe o ga julọ ni iyapa, ṣugbọn buru si resistance resistance giga. Ọwọn ti o wọpọ julọ ti a lo ni iwọn iwọn patiku 5 μm; ti ibeere iyapa ba ga, a le yan kikun 1.5-3 μm, eyiti o jẹ anfani lati yanju iṣoro iyapa ti diẹ ninu awọn matrix eka ati awọn ayẹwo paati pupọ. UPLC le lo awọn ohun elo 1.5 μm; 10 μm tabi o tobi patiku iwọn fillers ti wa ni nigbagbogbo lo fun ologbele-igbaradi tabi igbaradi ọwọn. 2.4 Erogba akoonu
Akoonu erogba n tọka si ipin ti ipele ti o somọ lori oju ti gel silica, eyiti o ni ibatan si agbegbe dada kan pato ati agbegbe ipo adehun. Akoonu erogba giga n pese agbara iwe giga ati ipinnu giga, ati pe a lo nigbagbogbo fun awọn apẹẹrẹ eka ti o nilo iyapa giga, ṣugbọn nitori akoko ibaraenisepo gigun laarin awọn ipele meji, akoko itupalẹ jẹ pipẹ; kekere erogba akoonu chromatographic ọwọn ni a kikuru onínọmbà akoko ati ki o le fi o yatọ si selectivities, ati ki o ti wa ni nigbagbogbo lo fun o rọrun ayẹwo ti o nilo dekun onínọmbà ati awọn ayẹwo ti o nilo ga olomi alakoso awọn ipo. Ni gbogbogbo, akoonu erogba ti C18 wa lati 7% si 19%. 2.5 Pore iwọn ati ki o pato dada agbegbe
Media adsorption HPLC jẹ awọn patikulu la kọja, ati ọpọlọpọ awọn ibaraẹnisọrọ waye ni awọn pores. Nitorina, awọn ohun alumọni gbọdọ wọ awọn pores lati wa ni adsorbed ati niya.
Iwọn pore ati agbegbe dada kan pato jẹ awọn imọran ibaramu meji. Iwọn pore kekere tumọ si agbegbe dada nla kan pato, ati ni idakeji. Agbegbe dada kan pato le ṣe alekun ibaraenisepo laarin awọn ohun elo apẹẹrẹ ati awọn ipele ifaramọ, mu idaduro pọ si, mu ikojọpọ ayẹwo ati agbara ọwọn, ati ipinya ti awọn paati eka. Awọn kikun la kọja ni kikun jẹ ti iru awọn kikun. Fun awọn ti o ni awọn ibeere iyapa giga, o niyanju lati yan awọn kikun pẹlu agbegbe dada nla kan pato; agbegbe dada kan pato le dinku titẹ ẹhin, mu iṣẹ ṣiṣe ti ọwọn dara, ati dinku akoko iwọntunwọnsi, eyiti o dara fun itupalẹ gradient. Awọn ohun elo ikarahun-mojuto jẹ ti iru awọn kikun. Lori ipilẹ ti aridaju ipinya, o niyanju lati yan awọn kikun pẹlu agbegbe dada kekere kan pato fun awọn ti o ni awọn ibeere ṣiṣe itupalẹ giga. 2.6 Pore iwọn didun ati darí agbara
Iwọn pore, ti a tun mọ ni “iwọn didun pore”, tọka si iwọn iwọn didun ofo fun patiku ẹyọkan. O le ṣe afihan daradara agbara ẹrọ ti kikun. Agbara ẹrọ ti awọn kikun pẹlu iwọn pore nla jẹ alailagbara diẹ diẹ sii ju ti awọn kikun pẹlu iwọn pore kekere. Fillers pẹlu iwọn pore kere ju tabi dogba si 1.5 milimita / g jẹ lilo pupọ julọ fun iyapa HPLC, lakoko ti awọn kikun pẹlu iwọn pore ti o tobi ju 1.5 milimita / g ni a lo ni akọkọ fun chromatography imukuro molikula ati kiromatogiramu kekere-titẹ. 2.7 Capping oṣuwọn
Capping le dinku awọn tente oke tailing ti o ṣẹlẹ nipasẹ ibaraenisepo laarin awọn agbo ogun ati awọn ẹgbẹ silanol ti o han (gẹgẹbi isunmọ ionic laarin awọn agbo ogun ipilẹ ati awọn ẹgbẹ silanol, awọn ologun van der Waals ati awọn ifunmọ hydrogen laarin awọn agbo ogun ekikan ati awọn ẹgbẹ silanol), nitorinaa imudara iṣẹ-ṣiṣe ti ọwọn ati apẹrẹ ti o ga julọ. . Awọn ipele isomọ ti a ko tii yoo gbejade awọn yiyan oriṣiriṣi ti o ni ibatan si awọn ipele isunmọ capped, pataki fun awọn ayẹwo pola.
- Ohun elo dopin ti o yatọ si omi kiromatogirafi ọwọn
Abala yii yoo ṣe apejuwe ipari ohun elo ti awọn oriṣiriṣi oriṣi ti awọn ọwọn kiromatogirafi olomi nipasẹ awọn igba miiran.
3.1 Yipada-alakoso C18 chromatographic iwe
Oju-iwe C18 jẹ iwe ipadasẹhin ti o wọpọ julọ ti a lo, eyiti o le pade akoonu ati awọn idanwo aimọ ti ọpọlọpọ awọn nkan Organic, ati pe o wulo si pola alabọde, pola alailagbara ati awọn nkan ti kii ṣe pola. Iru ati sipesifikesonu ti iwe chromatographic C18 yẹ ki o yan ni ibamu si awọn ibeere iyapa pato. Fun apẹẹrẹ, fun awọn oludoti pẹlu awọn ibeere iyapa giga, 5 μm * 4.6 mm * 250 mm awọn pato ni a lo nigbagbogbo; fun awọn nkan ti o ni awọn matiriki iyapa eka ati iru polarity, 4 μm * 4.6 mm * 250 mm ni pato tabi awọn iwọn patiku kekere le ṣee lo. Fun apẹẹrẹ, onkọwe lo iwe 3 μm * 4.6 mm * 250 mm lati ṣawari awọn idoti genotoxic meji ni celecoxib API. Iyapa ti awọn oludoti meji le de ọdọ 2.9, eyiti o dara julọ. Ni afikun, labẹ ipilẹ ti aridaju ipinya, ti o ba nilo itupalẹ iyara, iwe kukuru ti 10 mm tabi 15 mm nigbagbogbo yan. Fun apẹẹrẹ, nigbati onkọwe lo LC-MS/MS lati ṣe awari aimọ genotoxic ninu piperaquine fosifeti API, a lo iwe 3 μm*2.1 mm*100 mm. Iyapa laarin aimọ ati paati akọkọ jẹ 2.0, ati wiwa ayẹwo kan le pari ni iṣẹju 5. 3.2 Yipada-alakoso phenyl iwe
Oju-iwe Phenyl tun jẹ oriṣi ti ọwọn-alakoso iyipada. Iru ọwọn yii ni yiyan ti o lagbara fun awọn agbo ogun oorun. Ti idahun ti awọn agbo ogun aromatic ti a ṣewọn nipasẹ ọwọn C18 lasan ko lagbara, o le ronu lati rọpo iwe phenyl. Fun apẹẹrẹ, nigbati mo n ṣe celecoxib API, idahun paati akọkọ ti iwọn nipasẹ ọwọn phenyl ti olupese kanna ati sipesifikesonu kanna (gbogbo 5 μm * 4.6 mm * 250 mm) jẹ nipa awọn akoko 7 ti iwe C18. 3.3 Deede-alakoso iwe
Gẹgẹbi afikun ti o munadoko si iwe-atunṣe-alakoso, iwe-alakoso deede dara fun awọn agbo ogun pola ti o ga julọ. Ti tente oke naa ba yara pupọ nigbati o ba n pari pẹlu diẹ ẹ sii ju 90% ipele olomi ninu iwe-alakoso iyipada, ati paapaa ti o sunmọ ati ni lqkan pẹlu tente oke epo, o le ronu lati rọpo iwe-alakoso deede. Iru ọwọn yii pẹlu iwe hilic, ọwọn amino, iwe cyano, ati bẹbẹ lọ.
3.3.1 Hilic iwe Hilic iwe nigbagbogbo nfi awọn ẹgbẹ hydrophilic sinu pq alkyl ti a so pọ lati jẹki esi si awọn nkan pola. Iru ọwọn yii dara fun itupalẹ awọn nkan suga. Onkọwe lo iru ọwọn yii nigbati o n ṣe akoonu ati awọn nkan ti o jọmọ ti xylose ati awọn itọsẹ rẹ. Awọn isomers ti itọsẹ xylose tun le ya sọtọ daradara;
3.3.2 Amino iwe ati cyano iwe Amino iwe ati cyano iwe tọka si awọn ifihan ti amino ati cyano awọn iyipada ni opin ti awọn iwe adehun alkyl pq, lẹsẹsẹ, lati mu awọn selectivity fun pataki oludoti: fun apẹẹrẹ, Amino iwe jẹ kan ti o dara wun. fun iyapa awọn sugars, amino acids, awọn ipilẹ, ati awọn amides; ọwọn cyano ni yiyan ti o dara julọ nigbati o yapa hydrogenated ati awọn nkan ti o jọra igbekalẹ aito nitori wiwa awọn iwe ifowopamosi. Oju-iwe Amino ati iwe cyano le nigbagbogbo yipada laarin iwe alakoso deede ati ọwọn alakoso yiyipada, ṣugbọn iyipada loorekoore ko ṣe iṣeduro. 3.4 Chiral ọwọn
Chiral iwe, bi awọn orukọ ni imọran, ni o dara fun awọn Iyapa ati igbekale ti chiral agbo, paapa ni awọn aaye ti elegbogi. Iru iwe yii ni a le gbero nigbati ipele iyipada ti aṣa ati awọn ọwọn alakoso deede ko le ṣaṣeyọri ipinya ti awọn isomers. Fun apẹẹrẹ, onkọwe lo 5 μm * 4.6 mm * 250 mm chiral iwe lati ya awọn isomers meji ti 1,2-diphenylethylenediamine: (1S, 2S) -1, 2-diphenylethylenediamine ati (1R, 2R) -1, 2 -diphenylethylenediamine, ati awọn Iyapa laarin awọn meji ami nipa 2.0. Sibẹsibẹ, awọn ọwọn chiral jẹ gbowolori diẹ sii ju awọn iru awọn ọwọn miiran, nigbagbogbo 1W +/ege. Ti iwulo ba wa fun iru awọn ọwọn, ẹyọkan nilo lati ṣe isuna ti o to. 3.5 Ion paṣipaarọ ọwọn
Awọn ọwọn paṣipaarọ ion dara fun iyapa ati itupalẹ awọn ions ti o gba agbara, gẹgẹbi awọn ions, awọn ọlọjẹ, awọn acids nucleic, ati diẹ ninu awọn nkan suga. Gẹgẹbi iru kikun, wọn pin si awọn ọwọn paṣipaarọ cation, awọn ọwọn paṣipaarọ anion, ati awọn ọwọn paṣipaarọ cation ti o lagbara.
Awọn ọwọn paṣipaarọ cation pẹlu orisun kalisiomu ati awọn ọwọn orisun hydrogen, eyiti o dara julọ fun itupalẹ awọn nkan cationic gẹgẹbi awọn amino acids. Fun apẹẹrẹ, onkọwe lo awọn ọwọn ti o da lori kalisiomu nigbati o ṣe itupalẹ kalisiomu gluconate ati kalisiomu acetate ni ojutu flushing. Awọn nkan mejeeji ni awọn idahun ti o lagbara ni λ=210nm, ati iwọn iyapa de 3.0; onkọwe lo awọn ọwọn ti o da lori hydrogen nigbati o ṣe itupalẹ awọn nkan ti o jọmọ glukosi. Ọpọlọpọ awọn nkan pataki ti o ni ibatan - maltose, maltotriose ati fructose - ni ifamọ giga labẹ awọn aṣawari iyatọ, pẹlu opin wiwa bi kekere bi 0.5 ppm ati iwọn iyapa ti 2.0-2.5.
Awọn ọwọn paṣipaarọ Anion jẹ o dara julọ fun itupalẹ awọn nkan anionic gẹgẹbi awọn acids Organic ati awọn ions halogen; awọn ọwọn paṣipaarọ cation ti o lagbara ni agbara paṣipaarọ ion ti o ga ati yiyan, ati pe o dara fun iyapa ati itupalẹ awọn apẹẹrẹ eka.
Eyi ti o wa loke jẹ ifihan si awọn oriṣi ati awọn sakani ohun elo ti ọpọlọpọ awọn ọwọn kiromatogirafi olomi ti o wọpọ ni idapo pẹlu iriri onkọwe tirẹ. Awọn oriṣi pataki miiran ti awọn ọwọn chromatographic miiran wa ninu awọn ohun elo gangan, gẹgẹbi awọn ọwọn chromatographic nla-pore, awọn ọwọn chromatographic kekere-pore, awọn ọwọn chromatography affinity, awọn ọwọn chromatographic multimode, awọn ọwọn chromatography olomi-giga giga (UHPLC), awọn ọwọn omi chromatography supercritical SFC), bbl Wọn ṣe ipa pataki ni awọn aaye oriṣiriṣi. Iru pato ti iwe chromatographic yẹ ki o yan ni ibamu si eto ati awọn ohun-ini ti apẹẹrẹ, awọn ibeere iyapa ati awọn idi miiran.
Akoko ifiweranṣẹ: Jun-14-2024